药厂放行检测及方法验证用支原体qPCR检测试剂盒

《药厂放行检测及方法验证用支原体qPCR检测试剂盒》正文开始，本次阅读大概7分钟。

支原体核酸检测法（包括常规PCR和qPCR）以其检测时间短（仅需2-3小时）、灵敏度好和特异性高、操作简单而广受青睐。目前国内外药厂放行检测及方法验证（product release testing）采用的较多的是MB的:支原体qPCR检测试剂盒（经典法)和支原体常规PCR检测试剂盒（经典法）。其中，支原体qPCR检测试剂盒由于无须跑胶，且能定量，因而更受欢迎。

MB的支原体qPCR检测试剂盒（经典法）被称为支原体检测的金标准，主要基于以下几个原因：

遵循欧洲药典和日本药典要求。德国MB对该试剂盒进行了全面的验证，包括灵敏度、特异性和耐用性，并提供有验证报告，符合欧洲药典（EP 2.6.7）和日本药典（JP G3）规定，因而可替代传统的培养法和染色法。以灵敏度和特异性为例。

经典法qPCR试剂盒对以下欧洲药典规定的9种支原体的最低检测限均达到≤10CFU/ml

经典法qPCR试剂盒一次检测可涵盖所有可能污染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），而对细菌和真核细胞DNA没有交叉反应（见下表）。

经典法qPCR试剂盒含qPCR mix、阳性支原体DNA对照、内控DNA对照，均为冻干粉，稳定性强，复溶后即可使用。内控DNA对照，可监测支原体DNA抽提过程，以及是否存在PCR抑制导致的假阴性。

 欧洲和日本药典要求核酸法需包括样品的DNA抽提，再行支原体检测。

德国MB的支原体DNA提取试剂盒，具有极好的抽提效果，即使痕量支原体（如10CFU）提取DNA后也可检测出来。在用于工业放行检测时，经典法qPCR试剂盒与该试剂盒配合使用。